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PerkinElmer小動物活體成像底物D-熒光素鉀鹽

更新時間:2025-02-26

簡要描述:

PerkinElmer提供兩種用于體外(invitro),體內(invivo)和離體(exvivo)生物發(fā)光成像的熒光素酶底物:D-熒光素和腔腸素H

PerkinElmer 提供兩種用于體外(in vitro), 體內( in vivo)和離體(ex vivo)生物發(fā)光成像的熒光素酶底物:D-熒光素和腔腸素 H。D-熒光素是 Firefly 熒光素酶(如 Red-FLuc)的底物,可與我們的 Bioware Ultra 結合使用使用我們的 RediFect™ Red-FLuc 和 Red-FLuc-GFP 慢病毒顆粒轉染的生物發(fā)光腫瘤細胞系或細胞,用于體外、體內或離體成像。腔腸素 H 是 Renilla 和 Gaussia 熒光素酶的底物,可用于使用我們的 RediFect Green RenLuc 慢病毒顆粒轉染的細胞進行體內成像,或者當這些熒光素酶中的任何一種用作報告基因時。相應的底物對于體外、體內或離體的生物發(fā)光可視化是必需的。


在小鼠或其他小動物模型中建立表達螢火蟲熒光素酶( firefly luciferase)、海腎熒光素酶(Renilla luciferase)或高斯熒光素酶(Gaussia luciferase)的生物發(fā)光細胞系后,注射熒光素或腔腸素底物。然后,生物發(fā)光報告基因使用底物在細胞系內產生光,從而使小鼠(或其他)模型內的生物發(fā)光細胞可視化。這種發(fā)光可以使用適當?shù)?2D 或 3D 成像儀進行可視化和測量。


背景介紹

熒光素(Luciferin)是一種在各種生物發(fā)光生物的細胞中發(fā)現(xiàn)的化學物質。當熒光素(Luciferin)在熒光素酶(Luciferase)和 ATP 的催化作用下被氧化時,就會產生光。由于反應依賴于 ATP,它使研究人員能夠確定能量或生命的存在。熒光素酶(Luciferase)是生物體內催化熒光素(Luciferin)或者脂肪醛氧化發(fā)光的一類酶的總稱。熒光素酶可以從細菌,螢火蟲,海星等提取出來。螢火蟲熒光素(fireflyluciferase)由于發(fā)射光譜的特性,其是一種特別好的體外成像報告系統(tǒng)。


雙熒光素酶通常是指螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素。其中熒火蟲熒光素是從甲蟲(Photinus pyralis)中分離得到,分子量為61kDa;而海腎(Renilla)熒光素酶則是從海腎(Renilla reniformis)中分離,分子量為36kDa。這兩種酶的區(qū)別之一是他們的底物和輔因子不同:螢火蟲熒光素酶需要熒光素、氧氣、ATP和鎂離子同時存在才能發(fā)光;而海腎熒光素酶僅需要腔腸素(coelenterazine)和氧氣。螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的區(qū)別之二是發(fā)光的顏色不同:螢火蟲熒光素酶產生的光顏色呈現(xiàn)黃綠色,波長550-570nm;而海腎熒光素酶產生藍光,波長480nm。正是由于這兩種酶的底物和發(fā)光顏色不同,所以在雙報告實驗中得到廣泛應用。


熒光素可以以多種方式使用。它可用于各種體外測定,其中可以使用光度計或閃爍計數(shù)器監(jiān)測光的產生。它還可以用于監(jiān)測體內的光產生,并且可以使用 PerkinElmer 的 IVIS® 成像平臺進行監(jiān)測。由于熒光素可以穿透細胞膜,因此可以監(jiān)測轉化細胞的熒光素酶活性。


檢測原理

螢火蟲螢光素酶是一種胞內蛋白,大小為61KDa。在氧氣、ATP和鎂離子同時存在的條件下,催化底物螢火蟲螢光素氧化,生成氧化螢光素,并發(fā)出黃綠色光,其發(fā)光波長為560nm。

螢火蟲熒光素酶檢測原理


海腎螢光素酶也是一種胞內蛋白,大小為36KDa。只需要氧氣就可以催化腔腸素,氧化生成高能產物coelenteramide,并發(fā)出藍光,其發(fā)光波長為465nm。

海腎螢光素酶檢測原理

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